笛医生物科技有限公司
产品

2 ×Taq PCR Master Mix (With Dye)

货号 规格 促销价
DY10201 5ml 150.00
其他名称:
品牌: 笛医
CAS号:
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产品描述

即用型的常规PCR预混合液,含有Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2以及优化的反应缓冲液。反应时只需加入引物和模板即可进行扩增。产品中含有溴酚蓝染料,PCR后可直接进行电泳PCR产物具有3’-dA突出端,可轻松克隆至T载体。

产品特点

   速:延伸速度达到15-30 sec/kb

   扩增长度可达8kb

稳定性强:本产品含有优良的稳定剂,4℃可放置3个月,性能有保证;

T载体克隆:PCR产物具有3’-dA突出端,可轻松克隆至T载体;

GC含量扩增:已验证70% GC含量的DNA片段可高效扩增

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常用反应体系(50μl          

组分

体积(μl

2×Taq PCR Master Mix

25μL

上游引物

0.2-1.0μM(终浓度)

下游引物

0.2-1.0μM(终浓度)

模板DNA

1-50ng(质粒);10ng-1μg(基因组)

ddH2O

50μL

备注:Mg2+终浓度为2mM

扩增程序

扩增片段<3K                              扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp

94℃         1 分钟 30                           94℃          5分钟

94℃20                                 30次循环:    94℃5                     

30 次循环:  5060℃20                                       6860/kb

       72℃60/kb                                 72℃          5分钟     

72℃          5分钟                             4℃           保温

4℃           保温

使用建议:

1. 使用本试剂扩增得到的PCR产物 端有一突出"A"碱基,可直接克隆于T载体中

2. 需要溶解完全后使用,防止离子浓度不均匀

3. 应根据实验目的选择合适的循环数,循环数过少,会造成扩增量不足;循环数过多,扩增量增加,但突变率也会增加,并造成非特异性扩增

4. 根据引物 Tm 值设置合适退火温度,退火温度过低,会造成非特性扩增;过高可能扩增不到。

运输与保存:-20℃保存,冰袋运输。

质量保证:经检测无外源核酸酶残留,PCR 方法检测无大肠杆菌 DNA 残留,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因

应用实例

图例1)使用普通(A组)及含染料(B组)的2×Taq Master Mix配制的50μl扩增体系中,以5ngλDNA为模板,对500bp6.0KB片段的扩增结果。

泳道1500bp; 泳道21kb; 泳道32kb; 泳道44kb; 泳道56kb;泳道M1kb DNA LadderI

图例250μl扩增体系中,分别以50ng0.05ng人基因组DNA为模板,可对特定基因片段(380bp)进行很好的扩增。

泳道150ng

泳道25ng

泳道30.5ng

泳道40.05ng

泳道MDNA Ladder 2000


常见问题(Q&A)

Q1.  使用PCR Master Mix扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物时,为什么会出现涂抹带?

A1:造成涂抹带的原因有很多,因PCR Master Mix预混有浓度优化的Mg2+浓度(3mM)和Taq DNA聚合酶,可着重从以下几个方面考虑:污染、模板量过多、引物特异性不高或退火温度过低、循环数过多、甚至模板GC含量过高等。可以通过以下方法尝试解决:设置阴性对照(NTC)确认是否污染;建立模板浓度梯度;提高退火温度或进行touch down PCR;减少循环数。

Q2. 使用PCR Master Mix扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物时,为什么无条带?

A2:PCR反应成败很大程度上依赖于高质量的DNA模板,我们建议进行阳性对照(引物已验证具备扩增能力),排除模板对PCR反应的抑制。另外,建议优化引物Tm温度和增加延伸时间。对于低丰度基因,建议增加循环数。

Q3. 为什么出现非特异性条带

A3:大多数引物可直接使用55-60℃扩增,特异性良好。若出现非特异性扩增,建议优化引物退火温度。



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