笛医生物科技有限公司
产品

通用型DNA纯化回收试剂盒 (磁珠法)

货号 规格 促销价
DY10202-200T 200T 280.00
DY10202-50T 50T 90.00
其他名称: 胶回收,DNA回收
品牌: 笛医
CAS号:
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产品用途

本品可从由琼脂糖凝胶、PCR原液中,快速纯化回收长度50bp及以上的双链DNA片段;

使用本试剂盒纯化的DNA片段可用于PCR、酶切、测序、连接转化等下游实验。

产品活动:

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科普小课堂

磁珠的特点及其在核酸提取纯化中的应用

磁珠(磁性微球)采用经典的壳核结构制造,内核为聚合物微球,外层为超顺磁性物质,最外层采用特殊聚合物修饰,具有以下特点:超顺磁性、尺寸均一性、快速磁响应性、丰富羧基官能团、非常高的比表面积、良好的单分散性、长期稳定性、高批间重复性等。利用磁珠表面可以在一定条件下可逆性的吸附和解离DNA/RNA的特性,可以用于纯化基因、提取质粒、提取基因组DNA、提取病毒DNA等。还可以利用羧基、氨基、生物素、巯基交联蛋白,特异性的分离蛋白质。

操作步骤

步骤

操作

1

切胶纯化:从琼脂糖凝胶中切出包含目的DNA条带的胶块,放入洁净的1.5ml0.2ml离心管中;

原液纯化:PCR反应产物,放入洁净的1.5ml0.2ml离心管中;

2

切胶纯化:每离心管加入体积为凝胶体积3倍的 溶液PC, 然后加入5µl 磁珠悬浮液HMB(使用前必须混匀磁珠。混匀后,室温1~2 分钟,期间混匀1次以上;

原液纯化:每离心管加入体积为PCR原液体积3倍的 溶液PC,然后加入5µl 磁珠悬浮液HMB(使用前必须混匀磁珠。混匀后,室温1~2 分钟,期间混匀1次以上;

3

将离心管置于磁力架上,静置30秒,待磁珠富集于管壁后,彻底去除液体;

4

将离心管从磁力架取下,在离心管中加入 80%乙醇1.5ml离心管加入600µl 80%乙醇 ; 0.2ml离心管加入200µl 80%乙醇

分散磁珠,并清洗离心管内壁,然后将磁珠浸泡在80%乙醇1min以上

将离心管置于磁力架上,静置30秒,待磁珠富集在管壁后,彻底去除液体;

5

重复 第41次;

6

室温晾干5分钟;

7

每离心管加入30µl 洗脱缓冲液EB,分散磁珠,室温静置1~3分钟,期间混匀1次以上。将离心管置于磁力架上静置30 秒,待磁珠富集在管壁后,可吸出DNA用于后续操作;

如暂时不使用纯化产物,请将纯化产物存放于-20℃(不必分离磁珠与DNA溶液


操作细节

切胶称重

如使用切胶枪头切胶,切下胶块外形约1mm×4mm×6mm”,重量约为0.03g,体积约为30µl加入90µl溶液PC,胶块可以在室温下3min左右彻底溶解;使用手术刀片等方式切胶,请称量胶块重量,如凝胶重为0.04 g,体积约为40 µl需要加入120µl溶液PC;

切胶枪头

切胶枪头用法如下,将切胶枪头套于1000µl移液器的吸头端,拧紧切胶枪头,移液器量程调至500µl以上。将切胶枪头切口对准目的DNA片段正上方,垂直插透凝胶后,拔出切胶枪头。此时,含有DNA片段的胶块已经进入切胶枪头中,将切胶枪头口对准离心管口,将胶块迅速喷入离心管;

溶胶充分

如果凝胶未完全溶解,会明显降低DNA回收率。如胶块体积过大,建议先将胶块捣碎,后加入溶液PC室温顺利溶胶胶块越厚,溶胶所需时间越长。通常有如下几个原因,可导致溶胶不充分的:溶液PC体积低于凝胶体积的3倍、溶胶时间过短(<2min)、溶胶期间未能混匀数次、胶块大且捣碎 

颜色指示

无色的琼脂糖凝胶在溶液PC中完全溶解后,或无色的PCR产物与溶液PC混匀后,管中液体颜色如保持黄色,则可继续下一步操作;如溶液变为紫色或橙红色,请在溶液中加入10µl 3M乙酸钠(pH5.0~5.2)并混匀,待管中液体颜色变回黄色后,可继续下一步操作。另外,有些PCR产物或琼脂糖凝胶自带颜色,会影响颜色判断,如按照体积比“PCR原液(或凝胶):溶液PC=1:3”混合,可以正常纯化回收长度50bp以上的DNA片段;

尽除残液

每一轮漂洗磁珠的过程中,在磁力架富集磁珠后,应将液体彻底去除。去除液体时,离心管需要置于磁力架避免遗失磁珠导致DNA回收率降低。漂洗磁珠如无法保证将液体彻底去除,建议用80%乙醇漂洗磁珠3次;如使用浓度低于80%的乙醇,会降低DNA回收率

磁珠晾干

乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度,例如长时间晾干、加热晾干、长时间风吹晾干等,以免难以洗脱DNA 

DNA洗脱

洗脱缓冲液EB成分为 (10mM Tris pH8.00.1mM EDTA)。使用者可以选择ddH20TE等替代洗脱缓冲液。从磁珠上洗脱DNA溶液的pH值,对于DNA洗脱效率有明显影响,pH值低于7.0会降低DNA的洗脱效率,且不利于DNA常期保存;对于使用5µl磁珠悬浮液HMB的纯化操作,加入30µl洗脱缓冲液EB,通常会得到20µl左右的纯化产物;DNA磁珠上洗脱后如不立即使用,建议DNA 产物保存在-20℃,以防DNA降解

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