笛医生物科技有限公司
产品

高灵敏化学发光检测试剂盒(ECL)

货号 规格 促销价
DY30207 100mL 280.00
其他名称: ECL;发光液
品牌: 笛医
CAS号:
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产品简介

ECL Reagent是一种基于Luminol的高灵敏性、非放射性化学发光底物,用于检测免疫印迹中固定在膜上的标记有辣根过氧化物酶(HRP)的蛋白,可检测pg级的抗原。Luminol在酶的催化作用下发生氧化降解,在增强剂的作用下发射波长为428nm的极强的光信号,持续时间长、稳定性高、检测方便。

其原理是,蛋白质或核酸电泳分离后转印到膜上,以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白,或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液,在室温下孵育膜1分钟,将印记膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒中,然后暗室中将X光胶片压在膜上曝光数秒至数分钟。显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。也可不进行X光胶片曝光,而直接对印记膜进行荧光CCD扫描。光信号支持重复曝光,也可洗膜脱抗体后供再次检测。

贮藏条件

2-8℃避光保存,可稳定保存一年。

使用方法

1. 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作,将转印好的膜从转膜装置上卸下来,并用封闭剂封闭膜上的非特异结合位点,室温下摇晃封闭1小时或2-8℃静置封闭过夜。

   ※注意:封闭非常重要。

2. 弃封闭液,加入一抗工作液,室温下摇晃孵育1小时或2-8℃静置孵育过夜。(推荐抗体孵育浓度:一抗100500ngmL,二抗1050ngmL)。

3. 用洗膜缓冲液漂洗膜2次,然后用充分体积的洗膜缓冲液洗膜3-6次,每次5分钟。

4. 用标记HRP的二抗工作液室温下孵育1小时。

5. 重复步骤3,彻底洗掉没有结合的二抗。

6. 将试剂A和试剂B1:1的比例混合成ECL工作液,根据每平方厘米膜使用0.1-0.2mL的量配制工作液,用ECL工作液充分覆盖膜后室温孵育1分钟。

   ※注意:ECL工作液需现配现用,室温下放置不能超过1小时。

7. 用平头镊钳住膜,垂直置于吸水纸上吸去过量试剂,将膜置于两层保鲜膜之间,小心赶走膜与保鲜膜之间的气泡。

8.  将膜吸附蛋白的面朝上置于暗盒中,于暗室中,取出胶片覆于膜表面,第一次曝光60秒,之后根据结果调整曝光时间。

   ※注意:确保膜和保鲜膜上多余的液体已移除,曝光过程中要保持胶片干燥。

9. 取出胶片在显影液和定影液中显影。如果信号太强,减少曝光时间或脱掉抗体后降低抗体浓度重新孵育。

10. 在孵育后的最初5-30分钟内发光最强,发光最长可持续数小时,但随着时间的推移光信号减弱。

   ※注意:膜与胶片之间的移动,将影响图片效果,造成干扰。


包装规格

货号

规格

包装规格

DY30207

100mL50mL/50mL

1/1

DY30207

1L500mL/500mL

1/1


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